| Zeitbedarf: |
... Minuten. |
| Ziel: |
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| Material: |
 | Messpipetten
5ml |
| Pipettierhilfen |
| Eppendorf-Microfuge |
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| Eppendorf-Gefäße (1,5ml,
unterschiedliche Farben) |
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| Chemikalien: |
| 10fach
TBE-Elektrophorese-Puffer-Lösung (89 mmol/l Tris pH 7,6; 89 mmol/l
Borsäure; 2 mmol/l EDTA (aus dem BGK)
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| Parafilm |
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| 2-Propanol
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| Vorbereitung: |
Die Erbgut-Proben von Zwiebel oder
Hefe,
mit Parafilm verschlossen, werden solange in den Messzylindern im
Kühlschrank aufbewahrt, bis sich das Erbgut
abgesetzt hat. Die abgesetzten Erbgut-Proben
werden dekantiert, mit 5 ml kaltem 2-Propanol übergossen, resuspendiert
und in Reagenzgläser übertragen, mit Parafilm verschlossen und im
Kühlschrank aufbewahrt. Der Längenstandard wird aufgetaut
und auf Eis gehalten. |
| Durchführung
1: |
Die Reagenzgläser mit den
Erbgut-Proben werden aus dem Kühlschrank geholt. |
| Beobachtung
1: |
Das Erbgut hat sich am Boden abgesetzt. |
| Durchführung
2: |
Das abgesetzte Erbgut wird durch
vorsichtiges Schwenken mit dem darüberstehenden Alkohol vermischt
(Fachbegriff: Suspendieren ). |
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Zwiebel: |
Mit einer
umgedrehten 5 ml Messpipette wird
jeweils 1 ml in ein Eppendorf-Gefäß
überführt und in der
Eppendorf-Microfuge 1 min lang bei 10000 upm zentrifugiert. Nach der
Zentrifugation wird die Flüssigkeit (der Überstand ) vorsichtig
abgegossen.
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Hefe: |
Da der Anteil an Zellresten und
anderen Zellteilchen noch zu hoch ist, muss ein weiterer
Reinigungsschritt durchgeführt werden: Jeweils 1 ml der
2-Propanol-Suspension wird in
Eppendorf-Gefäße überführt und 90 s bei
10000 upm in der Microfuge zentrifugiert. Der Niederschlag wird in 2 ml
TBE-Puffer in einem 10 ml Messzylinder resuspendiert und erneut mit
demselben Volumen kaltem 2-Propanol überschichtet. Das an der Grenzschicht
ausgefallene Erbgut wird mit einer umgedrehten 5 ml Messpipette
abgesaugt und in 3 Eppendorf-Gefäße überführt (jeweils 1 ml). Diese
werden erneut für 90 s bei 10000 upm zentrifugiert. Nach der
Zentrifugation wird der Überstand vorsichtig
abgegossen |
| Beobachtung
2: |
Durch die Fliehkraft in der Zentrifuge
wird das unlösliche Erbgut an die Wand geschleudert. |
| Deutung: |
Die gelösten
Bestandteile bleiben in der Flüssigkeit. |
| Auswertung: |
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| Entsorgung: |
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| Quelle: |
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| Hintergrund: |
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| Did. Hinweise: |
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| WWW: |
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