| Das
brauchst Du: |
 | Elektrophorese-Kammer mit Zubehör
(Mini SubCell GT System aus dem „Blue Genes“ Kit
des Fonds der Chem. Industrie (BGK, vgl.
Fonds der Chem.
Industrie, 1998)) |
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| Eppendorf-Gefäße (1,5ml,
unterschiedliche Farben) |
| Eppendorf-Microfuge |
| Eppendorf-Pipetten
20µl mit Pipettenspitzen |
| Eisbad |
| Waage |
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| Chemikalien: |
Aus dem BGK:
| 10fach
TBE-Elektrophorese-Puffer-Lösung (89 mmol/l Tris pH 7,6; 89 mmol/l
Borsäure; 2 mmol/l EDTA |
| Größenmarker des Erbgutes (Lambda-Phagen-DNA
geschnitten mit Eco RI und Hind III) und AzurB-Chlorid |
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| DNA-Auftragspuffer |
Nicht im BGK enthalten:
| Eis |
| steriles Wasser |
| Herings-Erbgut (niedermolekular,
aus Heringssperma) |
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| Das
kannst Du machen: |
Mit einer 20 µl
Eppendorf-Pipette werden 20 µl bzw. 50
µl oder 100 µl TBE-Puffer in das Gefäß
eingefüllt und darin der Niederschlag
durch mehrfaches Aufsaugen in die Pipettenspitze gelöst und anschließend
auf Eis aufbewahrt. 100 mg Herings-Erbgut werden auf
der Waage abgewogen und in 10 ml TBE-Puffer gelöst. Pipettier-Schema für die Trennung
(vom
Lehrer durchgeführt):
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Gefäß Nr.: |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Herings-
Erbgut: |
- |
- |
- |
- |
8
µl |
Erbgut-
Größen-
marker |
8
µl |
- |
- |
- |
- |
Eigene
Probe |
- |
8
µl |
12
µl |
15
µl |
- |
Steriles
Wasser |
7
µl |
7
µl |
3
µl |
- |
- |
Auftrags-
puffer |
2
µl |
2
µl |
2
µl |
2
µl |
2
µl |
Die Flüssigkeiten in den
Eppendorf-Gefäßen werden durch Anschnippen gemischt und anschließend für
15 s bei 5000 upm in der Microfuge zentrifugiert. Dann werden jeweils 10 µl in eine
Kammer gefüllt und bei 120 V
getrennt, bis der erste blaue Farbstoff
die mittlere Kammern fast erreicht hat. Das
Gel wird dann entnommen und in einem
Färbeschälchen für 15 min mit der
AzurB-Chlorid-Lsg.
gefärbt. Dann wird es über Nacht in
Wasser entfärbt. |
| Beobachtung: |
Sowohl das
Zwiebel-,
als auch das
Hefe-Erbgut wird
durch den Farbstoff blau angefärbt. |
| Deutung: |
Es sind
unterschiedlich lange Fäden, die durch Zersetzungsvorgänge und Zerbrechen
beim Isolieren entstanden sind. Je kürzer die Erbgutfäden, desto weiter
sind sie im Gel gewandert. |
| Auswertung: |
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| WWW: |
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